氨基酸是構(gòu)建生物機(jī)體的眾多生物活性大分子之一，是構(gòu)建細(xì)胞、修復(fù)組織的基礎(chǔ)材料。它被人體用于制造抗體蛋白、血紅蛋白、酶和激素以維持和調(diào)節(jié)新陳代謝，是一切生命之源。
由于氨基酸的重要性，合適可靠的檢測方案將成為評估食品、飼料、藥物及生理樣品中氨基酸指標(biāo)的重要選擇。
HPLC—柱后衍生法，50多年來作為氨基酸領(lǐng)域的重要檢測手段，因為其高效的測試準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，深受廣大用戶的信賴。
氨基酸檢測在藥物、食品、飼料中的主要應(yīng)用有
● 通過分析氨基酸組鑒定多膚和蛋白質(zhì)；
● 原料藥和中間體中的雜質(zhì)和有關(guān)物質(zhì)的測定；
● 藥物中單個或總氨基酸的定量， 包括復(fù)雜基質(zhì)中標(biāo)記物的測定；
● 重組蛋白生產(chǎn)過程的控制；
● 確定氨基酸組成也是保證食品和飼料營養(yǎng)價值的必要條件；
● 用于產(chǎn)品質(zhì)量及過程監(jiān)測。
衍生方法介紹
Pickering Laboratories根據(jù)上述應(yīng)用的檢測對象的不同，將衍生方法分為OPA衍生法和茚三酮衍生法，兩種方法都可以與任何氨基酸陽離子交換柱和洗脫液組合使用。其中我們稱為Trione ®的茚三酮試劑，也廣泛應(yīng)用于氨基酸分析儀中。
OPA法與茚三酮法區(qū)別見下表：
氨基酸衍生法 | ||
_ | Trione®試劑分析法 | OPA試劑分析法 |
衍生試劑 | TlOO－預(yù)混試劑 ；自生產(chǎn)日期起計算， 4個月保質(zhì)期（950 ml/瓶） TlOOC －預(yù)混試劑；自生產(chǎn)日期起計算， 4個月保質(zhì)期（950 mL/瓶） T200 - 2部分試劑，混合后使用，從生產(chǎn)之日起12個月保質(zhì)期；4組／箱 (900mL／瓶） | OD104－氨基酸分析用OPA稀釋液； O120-OPA試劑（5g／瓶） 3700-2000 －疏基化合物。（10g／瓶） 這三種產(chǎn)品都是用于氨基酸OPA分析法 |
適用樣品 | 一級和二級氨基酸 | 一級氨基酸 在與OPA反應(yīng)之前需要檢測二級氨基酸氧化步驟。使用氧化步驟時，一級氨基酸的檢測靈敏度會有所降低。 |
檢測器 | UV/VIS | FLD |
儀器靈敏度 | 10 pmole （在色譜柱上） | 2 pmole （在色譜柱上） |
色譜柱&洗脫液 | 適用于任何陽離子交換柱氨基酸分析法 | 與任何用于氨基酸分析的陽離子交換柱配合使用 |
配置 | 單泵Ony×PCXI vector PCX+ 0.5 m L反應(yīng)器 | 單泵Ony×PCX/ vector PCX+ 0.15 ml反應(yīng)器。 ＊需要帶有0.5 mL和0.1 mL反應(yīng)器的雙泵OnyxPCX來檢測二級氨基酸。 在此模式下， 初級氨基酸的靈敏度會降低。 |
色譜柱的選擇
圖1：鈉柱氨基酸分析選擇
圖2：鋰柱氨基酸分析選擇
圖3：氨基酸標(biāo)品
圖4：豆粕樣品
圖5：水解單克隆樣品
Pickering產(chǎn)品
完整解決方案
歐洲藥典8.0對于氨基酸的柱后衍生茚三酮法做了詳細(xì)的要求，藥典對于包括化學(xué)、 動物、 人或草藥來源的活性物質(zhì)、賦形劑和制劑，順勢療法制劑，抗生素，制劑和容器等都有所要求。
Pickering Laboratories 將歐洲藥典作為測試依據(jù)，為客戶提供完整的氨基酸分析解決方案。
Pickering 柱后衍生儀
解決方案包括Onyx PCX/Vector PCX 柱后衍生儀器、分析柱、保護(hù)柱、緩沖液和Trione ®茚三酮試劑。并且對方法進(jìn)行了優(yōu)化， 在符合藥典各項體系適宜性要求的同時，提高了分析的靈敏度及分析效率。
Pickering全套試劑包
圖6：依據(jù)歐洲藥典8.0法測試氨基酸
關(guān)于Pickering Laboratories
美國Pickering Laboratories公司是僅有的專業(yè)提供人工測試體液和柱后衍生化學(xué)試劑、色譜柱、分析方法等柱后衍生分析整體解決方案的機(jī)構(gòu)，其不斷創(chuàng)新及良好的信譽(yù)被眾多的美國政府機(jī)構(gòu)如EPA、ATF、FDA、AOAC和很多廠商所認(rèn)可。
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