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國(guó)標(biāo)委發(fā)布《高致病性禽流感診斷技術(shù)》新增RT-PCR等兩種檢測(cè)方法

2021-01-26 11:03:23來(lái)源：化工儀器網(wǎng)關(guān)鍵詞：PCR閱讀量：3089

　　【儀器網(wǎng) 時(shí)事聚焦】2020年12月初，法國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)表聲明中，法國(guó)國(guó)家衛(wèi)生安全署(ANSES)參考實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)，該國(guó)西南部一家養(yǎng)殖場(chǎng)有6000只鴨子感染H5N8型病毒，并發(fā)現(xiàn)大量鴨子迅速死亡。2021年1月6日，法國(guó)農(nóng)業(yè)部后續(xù)通報(bào)，該國(guó)朗德省(Landes)養(yǎng)禽場(chǎng)發(fā)生22起家禽H5N8亞型高致病性禽流感疫情，5121只家鴨和珍珠雞感染，274只死亡，2.5萬(wàn)只被撲殺。

　　近幾年，H5N8型病毒已先后在歐洲以及日本、韓國(guó)、中國(guó)臺(tái)灣等多個(gè)國(guó)家和地區(qū)均發(fā)生過(guò)規(guī)?；l(fā)，引發(fā)了多方關(guān)切。

　　為保護(hù)我國(guó)畜牧業(yè)安全，加強(qiáng)高致病性禽流感的診斷技術(shù)，確保第一時(shí)間發(fā)現(xiàn)疫情，做到可防可控。近日，國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)正式發(fā)布《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(G/B T 18936—2020)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、中華人民共和國(guó)北京海關(guān)、中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心等單位負(fù)責(zé)起草。

　　標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了高致病性禽流感臨床診斷，樣品采集、保存與運(yùn)輸，病毒分離與鑒定，血凝和血凝抑制劑試驗(yàn)，禽流感病毒RT-PCR試驗(yàn)和禽流感病毒熒光RT-PCR試驗(yàn)的技術(shù)要求。

　　本標(biāo)準(zhǔn)將代替《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(G/B T 18936—2003)標(biāo)準(zhǔn)，與舊標(biāo)準(zhǔn)相比，新標(biāo)準(zhǔn)在技術(shù)方面出現(xiàn)幾點(diǎn)變化：一是增加了禽流感病毒RT-PCR試驗(yàn)；二是增加了禽流感病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試驗(yàn)；三是刪除了瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散(AGID)試驗(yàn)；四是刪除了間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。

　　此次新增的禽流感病毒RT-PCR試驗(yàn)和熒光RT-PCR試驗(yàn)主要適用于檢測(cè)禽組織、分泌物、排泄物等物質(zhì)中的禽流感病毒核酸。

　　目前 PCR 技術(shù)只能擴(kuò)增 DNA 模板，對(duì) RNA 模板不能直接擴(kuò)增。 mRNA反轉(zhuǎn)錄生成的 cDNA 可作為 PCR 的模板進(jìn)行擴(kuò)增，這種在 mRNA 反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行的 PCR 擴(kuò)增稱為 RT-PCR 。其特點(diǎn)是雜交靈敏度高，對(duì) RNA 的質(zhì)量要求較低，操作簡(jiǎn)便。目前該技術(shù)廣泛應(yīng)用于分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)等科研中。

　　而實(shí)時(shí)熒光RT-PCR(熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))指的是在PCR進(jìn)行的同時(shí)，對(duì)其過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的能力，數(shù)據(jù)可在PCR擴(kuò)增過(guò)程中進(jìn)行收集，而非在PCR結(jié)束之后，反應(yīng)以循環(huán)中首次檢測(cè)到目標(biāo)擴(kuò)增的時(shí)間點(diǎn)為特征，而非在一定循環(huán)數(shù)后目標(biāo)分子累計(jì)的擴(kuò)增量。目標(biāo)核酸的起始拷貝數(shù)越高，則會(huì)越快觀察到熒光的顯著增加。相反，終點(diǎn)法檢測(cè)(也稱 “讀板檢測(cè)”)測(cè)量的是PCR循環(huán)結(jié)束時(shí)累計(jì)的PCR產(chǎn)物量。

　　在儀器設(shè)備方面，新標(biāo)準(zhǔn)對(duì)適用儀器PCR擴(kuò)增儀及配套反應(yīng)管、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)、生物安全柜、微量移液、熒光PCR儀等的配備要求及操作規(guī)范做了清晰的介紹。

　　標(biāo)準(zhǔn)是科學(xué)、技術(shù)及實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)。每一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)的出臺(tái)都是因時(shí)因需而生，標(biāo)準(zhǔn)的制定為某個(gè)領(lǐng)域在一定范圍內(nèi)達(dá)到秩序起到良好的規(guī)范作用。時(shí)隔18年，《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(G/B T 18936—2020)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布，對(duì)于高致病禽流感病毒的檢測(cè)工作具有重要的技術(shù)指導(dǎo)意義。

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