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胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中*的除了培養(yǎng)基，*也是非常重要的一個(gè)角色，雖然細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)基本技術(shù)大同小異，每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件各不相同，但是，在細(xì)胞傳代過(guò)程中都少不了這個(gè)步驟—*消化。
細(xì)胞消化使用*時(shí)需要了解哪些問(wèn)題？
一、 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中為什么要使用*呢？*的作用是什么？
*是一種蛋白酶，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈，通過(guò)在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時(shí)，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。
圖1.*酶切位點(diǎn)
二、 使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，在使用*消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過(guò)程，這是何原因？
血清終止的原理其實(shí)是競(jìng)爭(zhēng)抑制，就是用過(guò)量的牛血清中含有的蛋白和*結(jié)合，使*失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì)。
三、 為什么使用了*消化，細(xì)胞還是成團(tuán)的，這可能是什么原因?qū)е碌模?br />
?、?消化時(shí)間不夠 ② 吹打力度不夠 ③ *消化液濃度不夠 ④ 細(xì)胞密度過(guò)高之后才消化傳代 ⑤ *存儲(chǔ)不當(dāng)，或者使用了過(guò)期*
四、 *分裝凍存時(shí)要注意什么？
*分裝時(shí)盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰４鏁r(shí)體積會(huì)膨脹，多次使用同一瓶*反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并增大污染的可能性。
五、 怎么才能判斷*消化*？
注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了。
一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙狀移動(dòng)就可以了，就應(yīng)該停止消化。
六、 *適用于哪些細(xì)胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？
*適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對(duì)纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。*的消化效果主要與pH值、溫度、*濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。
七、 *中的酚紅有哪些作用？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為pH指示劑，中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明：酚紅可以模擬固醇類激素(特別是雌激素)的作用。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí)，建議用不含酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè)，在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，也會(huì)使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者*。
圖 2. Phenol red test
八、 在做細(xì)胞凋亡檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞為什么不能用含有EDTA的*消化？
Annexin V(膜聯(lián)蛋白)是Ca2+依賴的蛋白，EDTA會(huì)螯合Ca2+從而影響Annexin V，進(jìn)而影響結(jié)果，因此需選用不含EDTA的*。建議放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化，時(shí)間可以長(zhǎng)一點(diǎn)。隨時(shí)觀察細(xì)胞情況，避免消化過(guò)度；也可使用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下，后用槍吹勻，比消化簡(jiǎn)單，還可避免使用*帶來(lái)的傷害。
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