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脊髓性肌萎縮癥（SMA）

脊髓性肌萎縮癥（SMA），是一類由脊髓前角運動神經元變性導致肌無力、肌萎縮的疾病。由運動神經元功能基因(SMN1) 隱性突變引起，屬常染色體隱性遺傳病，臨床并不少見。主要臨床表現(xiàn)為進行性、對稱性，肢體近端為主的廣泛性弛緩性麻痹與肌萎縮，智力發(fā)育及感覺均正常。

SMN1基因編碼存活運動神經元（SMN）蛋白 ——一種遍布全身的蛋白質，對于運動神經元細胞的結構維持和功能至關重要。大腦和脊髓中的運動神經元控制整個身體的肌肉運動。如果沒有足夠的功能性SMN蛋白，那么運動神經元就會死亡，導致衰弱且通常致命的肌肉無力。由SMN1基因突變引起的SMA通常根據(jù)發(fā)病年齡和嚴重程度分為幾種亞型；其中嬰兒發(fā)病的SMA是嚴重和常見的亞型。患有這種疾病的兒童頭部抬頭，吞咽和呼吸都有問題。這些癥狀可能在出生時出現(xiàn)，也可能在6個月后出現(xiàn)。

近十年來，在針對SMA患者的治療策略方面取得了顯著進展：2016年12月Nusinersen反義寡核苷酸療法迅速獲得FDA批準用于所有年齡的SMA患者，可提高SMN蛋白表達并改善輕度SMA兒童和青少年的運動功能；2019年5月批準的靜脈注射表達SMN1 cDNA (scAAV9-SMN)的 重組腺相關病毒基因療法onasemnogene abeparvovec-xioi用于提高2歲及以下嬰兒的生存和運動機能。

因為SMN水平無法在活著的患者的中樞神經系統(tǒng)中測量，有關疾病相關的SMN表達水平變化和與疾病相關的數(shù)據(jù)很少。了解SMN在正常和患病人群、以及發(fā)展治療過程中的動態(tài)表達變化將有助于進一步優(yōu)化臨床治療。

來自約翰霍普金斯大學醫(yī)學院的研究人員對臨床SMA患者進行分組，對分離的人的腦、脊髓、髂腰肌、隔膜、肝等組織中SMN mRNA和蛋白水平分別進行了量化動態(tài)檢測。其中，采用HTRF®（均相時間分辨熒光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）檢測技術進行不同組織的SMN蛋白定量檢測。研究發(fā)現(xiàn)圍產期全組織SMN蛋白水平正常下降，這支持臨床上在出生后要盡快開始SMN誘導治療；部分患者由于ASOs（反義核苷酸）在脊柱和大腦吻側區(qū)域的分布有限，可能限制了這些區(qū)域的運動單元對這些患者的臨床反應。這些結果對SMA患者的優(yōu)化治療具有重要意義，并為進一步研究提高鞘內注射ASOs的生物利用度提供了依據(jù)。

文章技術路線：

HTRF定量脊髓標本中SMN蛋白的表達數(shù)據(jù)(對照組為75例;n = 16例SMA，患者年齡從15周妊娠(GA)到168個月不等)，如下圖所示：

HTRF實驗方法:

HTRF®（均相時間分辨熒光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）技術基于時間分辨熒光（TRF）和熒光共振能量轉移（FRET）兩大技術原理。將熒光的靈敏性、均相免洗和低背景等特點結合在一起。廣泛用于GPCRs，激酶，細胞因子，磷酸化蛋白，表觀遺傳，生物大分子（抗體）等靶點的檢測和定量。

HTRF SMN assay kit：將10 μL細胞裂解液轉移到96/384淺孔板中，加入5μL的熒光供體（Donor）和5 μL的熒光受體(Acceptor)。孵育過夜后，直接在EnVision多模式讀板儀(PerkinElmer)或其他HTRF®兼容的酶標儀上進行讀值即可。

珀金埃爾默公司一如既往的為用戶提供客制化高靈敏度檢測試劑和高品質的檢測設備：

EnVision多標記微孔板讀板儀

EnSight多標記微孔板讀板儀

Victor Nivo多標記微孔板讀板儀

參考文獻

1. Ramos, Daniel M., et al. "Age-dependent SMN expression in disease-relevant tissue and implications for SMA treatment." Journal of Clinical Investigation 129.11 (2019): 4817-4831.